Ponente
Descripción
La leptospirosis canina es una zoonosis a causa de los habitos domesticos de los caninos y el contacto continuo que tienen con los humanos, por lo anterior constituye un grave problema sanitario (Cachay, 2006). Existen diversas herramientas diagnosticas posibles para la detección de la Leptospira spp.,destaca la PCR, la cual a través de sus bondades y versatilidad se puede utilizar a partir de muestras biológicas (orina o sangre) como herramienta diagnostica en casos de sospecha de leptosipirosis para diagnostico, control y prevención. Objetivo fue estandarizar la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa convencional (cPCR) para Leptospira spp. a partir de sangre entera y determinar la frecuencia del mismo en caninos que acuden al Hospital Veterinario de la FCV, UNA entre los meses feb a julio, 2023.Se utilizaron 71 muestras de ADN de caninos. Las mismas fueron extraídas a partir de sangre entera utilizando el Kit de extracción comercial (ThermoScientific™), según instrucciones del fabricante. La presencia del microorganismo fue determinada utilizando cebadores 16S ARNr de la bacteria Leptospira spp, descrito por Merien et al., (1992). Los productos fueron sometidos a electroforesis mediante gel de agarosa (LE Agarose, Promega) al 1,5 %, utilizando Bromuro de etidio como marcador para la visualización de bandas de ADN; la observación del gel se logró gracias al transluminador (DIGIDOC-IT UVP) con luz ultravioleta.
Controles negativos y positivos fueron utilizados en cada una de las reacciones de PCR, para los positivos correspondió a ADN de Leptospira spp. patogénica de referencia (L. hardjo), donados por el Lab. Central de Salud Publica de cultivos puros. En cuanto a los negativos se utilizó agua molecular.La frecuencia de Leptospira spp. en caninos domésticos fue del 8% (6/71). Todas las muestras resultaron positivas al gen endógeno. Logrando ademas, la estandarización del protocolo.
Introducción
La leptospirosis canina es una zoonosis a causa de los habitos domesticos de los caninos y el contacto continuo que tienen con los humanos, por lo anterior constituye un grave problema sanitario (Cachay, 2006). Existen diversas herramientas diagnosticas posibles para la detección de la Leptospira spp.,destaca la PCR, la cual a través de sus bondades y versatilidad se puede utilizar a partir de muestras biológicas (orina o sangre) como herramienta diagnostica en casos de sospecha de leptosipirosis para diagnostico, control y prevención.
Objetivo
Objetivo fue estandarizar la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa convencional (cPCR) para Leptospira spp. a partir de sangre entera y determinar la frecuencia del mismo en caninos que acuden al Hospital Veterinario de la FCV, UNA entre los meses feb a julio, 2023.
Metodología
Se utilizaron 71 muestras de ADN de caninos. Las mismas fueron extraídas a partir de sangre entera utilizando el Kit de extracción comercial (ThermoScientific™), según instrucciones del fabricante. La presencia del microorganismo fue determinada utilizando cebadores 16S ARNr de la bacteria Leptospira spp, descrito por Merien et al., (1992). Los productos fueron sometidos a electroforesis mediante gel de agarosa (LE Agarose, Promega) al 1,5 %, utilizando Bromuro de etidio como marcador para la visualización de bandas de ADN; la observación del gel se logró gracias al transluminador (DIGIDOC-IT UVP) con luz ultravioleta.
Controles negativos y positivos fueron utilizados en cada una de las reacciones de PCR, para los positivos correspondió a ADN de Leptospira spp. patogénica de referencia (L. hardjo), donados por el Lab. Central de Salud Publica de cultivos puros. En cuanto a los negativos se utilizó agua molecular.
Conclusión
Los resultados obtenidos revelan que la utilizacion de la técnica cPCR para la detección de Leptospira spp. en fase aguda a partir de sangre entera de caninos domésticos es de gran utilidad como herramienta adicional de diagnóstico, demostrando excelente sensibilidad y especificidad.
Resultados
La frecuencia de Leptospira spp. en caninos domésticos fue del 8% (6/71). Todas las muestras resultaron positivas al gen endógeno. Logrando ademas, la estandarización del protocolo.
| Area | Ciencias Agrarias y Ambientales |
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